2017年全国执业药师知识必备：药物分析辅导(一)

一：六一散含量测定方法
　　六一散处方为：滑石粉600g，甘草100g。
    　2005《中国药典》六一散含量测定项下：
   　 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵1.725g，加水300ml使溶解，用磷酸调节pH值至3.5）（65：35）为流动相；检测波长为250nm。理论板数按甘草酸峰计应不低于3000。
    　供试品溶液的制备：取本品约1.5g，精密称定，精密加入流动相25ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
    　文献报道的以甘草酸单铵为指标的，如：陈建华等用HPLC法测定六一散中甘草酸单铵的含量，高效液相色谱仪为Waters 510/ 484/ 75B 色谱系统。采用Hypersil C18 (4.6×150,5μ) 分析柱，流动相为甲醇-含3 %冰醋酸的0.2mol/ L醋酸铵溶液(62：38)，流速1.2ml/min，检测波长250nm，柱温室温。样品用流动相超声处理，结果甘草酸单铵的线性范围1.6～8μg，平均加样回收率为99.4%。

二：六应丸含量测定方法
　　六应丸处方为：丁香，蟾酥，雄黄，牛黄，珍珠，冰片。
    　2005《中国药典》六应丸含量测定项下：
    　色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.5%磷酸二氢钾溶液（50：50）（用磷酸调节pH值至3.2）为流动相；检测波长为296nm。理论板数按华蟾酥毒基峰计应不低于9000。
    　供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取约0.3g，精密称定，精密加入甲醇20ml，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　　　

　　倪坤仪等使用自制的1-溴乙酰基对硝基苯为衍生试剂，制成对硝基苯甲酰甲基酯，在254nm检测，分离测定了牛黄及其制剂（六应丸等）中胆酸、猪去氧胆酸等的含量。

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　牛黄解毒片含量测定方法
　　牛黄解毒片处方为：人工牛黄5g，雄黄50g，石膏200g，大黄200g，黄芩150g，桔梗100g，冰片25g，甘草50g。
    　2005《中国药典》牛黄解毒片含量测定项下：
    　色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸（45：55：0.2）为流动相；检测波长为315nm。理论板数按黄芩苷峰计应不低于3000。
     　供试品溶液的制备：取本品20片（包衣片除去包衣），精密称定，研细，取0.6g，精密称定，置锥形瓶中，加70%乙醇30ml，超声处理（功率 250W，频率33kHz）20分钟，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀；精密量取2ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。
    　文献报道的以黄芩苷为指标的，如：吴丽群用HPLC法测定牛黄解毒片中黄芩苷的含量，采用Agilent-1100高效液相色谱仪，色谱柱为DiamonsiC18，200×4.6mm ID，5μm，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(55：45)，检测波长274nm，柱温室温，流速1.0ml/min。样品用70%乙醇超声处理，结果回收率为101.6%，RSD小于1.3%。
   　 李静瑜用HPLC法测定牛黄解毒片中黄芩苷的含量，采用惠普HP1100高效液相色谱仪，色谱柱为HP Hypersil-ODS（5μm，125×4mm），流动相为甲醇-水-磷酸（45：55：0.2），检测波长315nm，柱温室温。
    　陈胜璜用双波长法测定牛黄解毒片中黄芩甙的含量，采用日本岛津UV-265紫外分光光度计，双波长为240.2nm和278.0nm，样品用75%甲醇超声处理。
    　以蒽醌类为含量测定指标的文献报道较多，如：李太平等用HPLC法测定了大黄素、大黄酸的含量，采用岛津LC-10AVP液相色谱仪，色谱柱为Diamonsil (TM 钻石)，C18柱(20cm×4.6,5μm)，流动相为甲醇-水-磷酸(720：280：1)，检测波长254nm，流速1.5mL/min，柱温 30℃。样品用甲醇超声处理后用盐酸水解、氯仿提取，结果大黄素进样量在0.469～1.407μg时呈良好的线性关系(r=0.9992)，大黄酸在进样量为0.3125～0.9375μg时呈良好的线性关系(r=0.9992)，加样回收率分别为98.2 %(大黄素)， 98.4%(大黄酸)，RSD分别为0.43%(大黄素)，0.72%(大黄酸)。
    　杨冬梅等用薄层扫描法测定了大黄素的含量，采用岛津CS-930薄层扫描仪，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液，硅胶G板，Λs=440nm，ΛR=560nm。样品用乙醚超声处理。
    　 以胆酸为指标的，如：凌丽美用薄层扫描法测定了胆酸的含量，以异辛烷-正丁醚-冰醋酸(8：5：5)为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，双波长反射法锯齿扫描Λs=390nm，λR=650nm。样品的处理方法：用甲醇超声提取，再用20%氢氧化钠回流提取，用稀盐酸调节pH值至2，用醋酸乙酯提取。

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牛黄解毒片含量测定方法

　　牛黄解毒片处方为：人工牛黄5g，雄黄50g，石膏200g，大黄200g，黄芩150g，桔梗100g，冰片25g，甘草50g。
   　 2005《中国药典》牛黄解毒片含量测定项下：
   　 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸（45：55：0.2）为流动相；检测波长为315nm。理论板数按黄芩苷峰计应不低于3000。
   　  供试品溶液的制备：取本品20片（包衣片除去包衣），精密称定，研细，取0.6g，精密称定，置锥形瓶中，加70%乙醇30ml，超声处理（功率 250W，频率33kHz）20分钟，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀；精密量取2ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。
    　文献报道的以黄芩苷为指标的，如：吴丽群用HPLC法测定牛黄解毒片中黄芩苷的含量，采用Agilent-1100高效液相色谱仪，色谱柱为DiamonsiC18，200×4.6mm ID，5μm，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(55：45)，检测波长274nm，柱温室温，流速1.0ml/min。样品用70%乙醇超声处理，结果回收率为101.6%，RSD小于1.3%。
    　李静瑜用HPLC法测定牛黄解毒片中黄芩苷的含量，采用惠普HP1100高效液相色谱仪，色谱柱为HP Hypersil-ODS（5μm，125×4mm），流动相为甲醇-水-磷酸（45：55：0.2），检测波长315nm，柱温室温。
    　陈胜璜用双波长法测定牛黄解毒片中黄芩甙的含量，采用日本岛津UV-265紫外分光光度计，双波长为240.2nm和278.0nm，样品用75%甲醇超声处理。
    　以蒽醌类为含量测定指标的文献报道较多，如：李太平等用HPLC法测定了大黄素、大黄酸的含量，采用岛津LC-10AVP液相色谱仪，色谱柱为Diamonsil (TM 钻石)，C18柱(20cm×4.6,5μm)，流动相为甲醇-水-磷酸(720：280：1)，检测波长254nm，流速1.5mL/min，柱温 30℃。样品用甲醇超声处理后用盐酸水解、氯仿提取，结果大黄素进样量在0.469～1.407μg时呈良好的线性关系(r=0.9992)，大黄酸在进样量为0.3125～0.9375μg时呈良好的线性关系(r=0.9992)，加样回收率分别为98.2 %(大黄素)， 98.4%(大黄酸)，RSD分别为0.43%(大黄素)，0.72%(大黄酸)。
    　杨冬梅等用薄层扫描法测定了大黄素的含量，采用岛津CS-930薄层扫描仪，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液，硅胶G板，Λs=440nm，ΛR=560nm。样品用乙醚超声处理。
     　以胆酸为指标的，如：凌丽美用薄层扫描法测定了胆酸的含量，以异辛烷-正丁醚-冰醋酸(8：5：5)为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，双波长反射法锯齿扫描Λs=390nm，λR=650nm。样品的处理方法：用甲醇超声提取，再用20%氢氧化钠回流提取，用稀盐酸调节pH值至2，用醋酸乙酯提取。

www.59wj.com 四物合剂处方为：当归250g，川芎250g，白芍250g，熟地黄250g。
    2005《中国药典》四物合剂含量测定项下：
    色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以异丙醇-甲醇-醋酸-水-（2：25：2：71）为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计应不低于2000。
    供试品溶液的制备：精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
    文献报道的方法一般以藁本内酯为指标，如：苗爱东等用SPE-HPLC测定四物合剂中藁本内酯的含量，采用美国Waters高效液相色谱系统，色谱柱为Phenomenex Luna C18 ( 5μm，4.6mm×150mm)，流动相为甲醇-水( 65：35)，流速1mL/min，温度35℃，检测波长325nm。样品用水超声处理后用已处理好的High Capacity C18固相萃取柱(10mL甲醇活化, 5mL水平衡)处理，取甲醇洗脱液。藁本内酯在0.175～0.7μg范围内线性关系良好(r =0.9999)，平均回收率100.2，RSD为1.6 (n =6)。